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蛋白質(zhì)電泳的基本原理

2154 人參與  2018年08月06日 10:56  分類 : 醫(yī)藥化學  評論

蛋白質(zhì)電泳的基本原理

電泳不但應用于蛋白質(zhì)的分離與含量的測定,而且在免疫學實驗中有許多新的應用。例如:診斷乙型肝炎的乙型肝炎抗原(HBAg)的電泳測定>診斷原發(fā)性肝癌的甲胎蛋白(AFP>的電泳測定等等。
將兩個白金電極放在氯化鈉溶液中,通上直流電,則兩電極間形成一個恒定的電場。溶液中帶正電荷的Na+向負極移動,帶負電荷的cr向正極移動。結果在負極得到NaOH,在正極得到Cl2。這現(xiàn)象是大家熟悉的,叫做電解。膠體質(zhì)點(如蛋白質(zhì)分子)的表面也帶有電荷。由于電荷的存在,通電時,膠體質(zhì)點就能向電場一極移動。這種現(xiàn)象叫做電泳。事實上,不管離子也好,膠體質(zhì)點也好,這種在電場的影響下移動的現(xiàn)象,在本質(zhì)上是沒有區(qū)別的,不過名稱不同而已。

一般臨床檢驗室對電泳的應用,主要還是蛋白質(zhì)的檢定。以下就談談蛋甶質(zhì)電泳的原理。蛋白質(zhì)是由氨基酸組成的,所以血淸中各種蛋白質(zhì)都和氨基酸一樣具有酸性基團(-COOH),或鹼性基團(-NH2)。
若溶液的PH值低于等電點,則這個蛋白質(zhì)帶生電荷,在電場中向負極移動。反之,溶液的PH值大于等電點,則這個蛋白質(zhì)帶負電荷,在電場中向正極移動。蛋白質(zhì)兩性離各種蛋白質(zhì)都有它的等電點。人血漿蛋白質(zhì)的等電點如表46。其等電點都低于PH7.5,所以在pH比它們等電點高的緩沖液中(PH8.6時),蛋白質(zhì)帶負電荷,在電場中向正極移動。

一蛋白質(zhì)在電場中移動的速度,是和它本身所帶的電量、電場的強度和運動中所受到的阻力有關。因此,在同一條件下各種蛋白質(zhì)的移動速度不同。例如人血淸中各種蛋白質(zhì)等電點不同,在同一PH溶液中移動速度不同,故電泳時能在電泳支持物(如濾紙或瓊脂等)上區(qū)分出各個蛋白質(zhì)。經(jīng)染色后,得到鮮明的色帶圖譜。將各條色帶剪下分別溶于脫色劑中,再進行比色測定,就能求出各種蛋白質(zhì)占總蛋白量的百分率,這就是用電泳法分離和測定蛋白質(zhì)的基本原理。

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